Разработка методики определения методом высокоэффективной жидкостной хроматографии молекулярно-массового распределения хитозана и содержания примесных соединений в препаратах хитозана на колонке с высокосшитым полидивинилбензольным сорбентом | 2017 ИФХЭ РАН

Разработка методики определения методом высокоэффективной жидкостной хроматографии молекулярно-массового распределения хитозана и содержания примесных соединений в препаратах хитозана на колонке с высокосшитым полидивинилбензольным сорбентом

В.Б. Хабаров, А.Я. Пронин, А.К. Буряк

Лаборатория  физико-химических основ хроматографии и хромато-масс-спектрометрии

Биологическая активность хитозана зависит от  молекулярно-массового распределения (ММР) его полимерных молекул и от примесей в препарате. На рисунке представлена хроматограмма полифракционного хитозана (степень деацетилирования 85 %), полученная с помощью разработанной методики: 1 – полимерные молекулы хитозана (Vr = 0.48 мл) с молекулярной массой (ММ) 5010–1120000 Да; 2 –  полимерные  молекулы с хитозан-хитиновыми звеньями (Vr = 0.86 мл); 3 – молекулы хитозан-белкового  комплекса (Vr  = 1.27 мл). Детектор – рефрактометрический.

Колонка (150 х 3 мм) с высокосшитым полидивинилбензольным сорбентом, фр. 10 мкм. Подвижная фаза – 4 %-ный водный раствор уксусной кислоты, 0.2 мл/мин; объем пробы – 10 мкл 0.05 %-ного раствора хитозана   в  подвижной фазе.

Для расчета ММР полимерных молекул хитозана отдельно получают градуировочную кривую с помощью стандартов полимера декстрана с ММ 0.504–2000 кДа в линейном диапазоне.

014

Хроматографический пик 1 не поглощает в УФ-области, поскольку алифатические амины не имеют полосы поглощения в этой области спектра. Хроматографические пики 2 и 3 поглощают УФ при длине волны 235 нм  за счёт  пептидной связи –CO–NH– в молекуле белка (см. хроматографический пик пунктиром).

Полимерные молекулы в хроматографическом пике 2 поглощают при длине волны 235 нм значительно интенсивнее, чем молекулы в пике 3, в то время как площади этих пиков различаются незначительно. Это соответствует тому, что молекул недеацетилированного хитина (N-ацетил-2-амино-2-дезокси-D-глюкозы) в препарате хитозана значительно больше (5–15 %), чем молекул хитозан-белкового комплекса (до 1 % белка).

Использование  высокосшитого полидивинилбензольного сорбента для приготовления высокоэффективных колонок для жидкостной хроматографии позволило превзойти  уровень зарубежных исследований.  Предложена новая технология упаковки полимерных сорбентов в колонки.

Разработанная методика определения ММР полимерных молекул хитозана  и содержания примесей в  хитозане  успешно применяется ВНИТИБП и ЗАО “Биопрогресс” для совершенствования промышленной технологии получения хитозана из панцирей краба.

Методика полностью готова к реализации.

Результаты НИР защищены патентами РФ   № 2278379 (2006 г.),  № 2295127 (2007 г.) № 2362143. МПК7 GOIN 21/05 (2009 г.).

Соисполнитель: Всероссийский научно-исследовательский и  технологический институт биологической промышленности (ВНИТИБП).


Версия для печати Версия для печати
 
 
shadow shadow
Яндекс.Метрика